Հեղուկ քրոմատագրությամբ քանակական անալիզի սկզբունքներն ու մեթոդները

Հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի տարանջատման մեխանիզմը հիմնված է խառնուրդի բաղադրիչների փոխհարաբերությունների տարբերության վրա երկու փուլերի համար:

Ըստ տարբեր անշարժ փուլերի՝ հեղուկ քրոմատոգրաֆիան բաժանվում է հեղուկ-պինդ քրոմատոգրաֆիայի, հեղուկ-հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի և կապակցված փուլային քրոմատոգրաֆիայի:Առավել լայնորեն կիրառվում են հեղուկ-պինդ քրոմատոգրաֆիան՝ սիլիկատագելով որպես լցոնիչ և կապակցված ֆազային քրոմատոգրաֆիան՝ միկրոսիլիկով՝ որպես մատրիցով:

Ըստ անշարժ փուլի ձևի՝ հեղուկ քրոմատոգրաֆիան կարելի է բաժանել սյունակային քրոմատոգրաֆիայի, թղթային և բարակ շերտով քրոմատոգրաֆիայի։Ըստ կլանման հզորության՝ այն կարելի է բաժանել ադսորբցիոն քրոմատոգրաֆիայի, բաժանման քրոմատոգրաֆիայի, իոնափոխանակման քրոմատոգրաֆիայի և գել թափանցող քրոմատոգրաֆիայի։

Վերջին տարիներին հեղուկ սյունակային քրոմատոգրաֆիայի համակարգին ավելացվել է բարձր ճնշման հեղուկի հոսքի համակարգ՝ շարժական փուլը արագորեն հոսում է բարձր ճնշման տակ՝ բարելավելու տարանջատման էֆեկտը, ուստի բարձր արդյունավետությամբ (նաև հայտնի է որպես բարձր ճնշման) հեղուկ քրոմատագրություն։ առաջացել է.

ՄԱՍ
01 Հեղուկ քրոմատագրության քանակական անալիզի սկզբունք

Որակական հիման վրա քանակական գնահատման համար որպես ստանդարտ պահանջվում են մաքուր նյութեր.

Հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի քանակականացումը համեմատաբար քանակական մեթոդ է, այսինքն՝ խառնուրդում անալիտի քանակը գնահատվում է մաքուր ստանդարտ նմուշի հայտնի քանակից։

ՄԱՍ
02 Հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի միջոցով քանակականացման հիմք

Չափված բաղադրիչի (W) քանակությունը համաչափ է արձագանքման արժեքին (A) (գագաթի բարձրությունը կամ գագաթնակետի տարածքը), W=f×A:

Քանակական ուղղման գործակից (զ). Դա քանակական հաշվարկի բանաձևի համաչափության հաստատունն է, և դրա ֆիզիկական նշանակությունը չափված բաղադրիչի քանակն է, որը ներկայացված է արձագանքման միավորի արժեքով (գագաթնակետային տարածք):

Քանակական ուղղման գործակիցը կարելի է ստանալ ստանդարտ նմուշի հայտնի քանակից և դրա արձագանքման արժեքից:

Չափել անհայտ բաղադրիչի պատասխանի արժեքը, և բաղադրիչի քանակը կարելի է ստանալ քանակական ուղղման գործակցով:

ՄԱՍ
03 Ընդհանուր տերմիններ քանակական վերլուծության մեջ

Նմուշ (նմուշ)՝ քրոմատոգրաֆիկ անալիզի համար անալիտ պարունակող լուծույթ:Բաժանված է ստանդարտ և անհայտ նմուշների:

Ստանդարտ. Մաքուր արտադրանք՝ հայտնի կոնցենտրացիայով:Անհայտ նմուշ (անհայտ). Խառնուրդ, որի կոնցենտրացիան պետք է փորձարկվի:

Նմուշի քաշը. Փորձարկվող նմուշի սկզբնական կշռումը:

Նոսրացում. անհայտ նմուշի նոսրացման գործակիցը:

Բաղադրիչ՝ քանակական վերլուծության ենթակա քրոմատոգրաֆիկ գագաթնակետ, այսինքն՝ անալիտիկ, որի պարունակությունը անհայտ է:

Բաղադրիչի քանակը (քանակը)՝ փորձարկվող նյութի պարունակությունը (կամ կոնցենտրացիան):

Ամբողջականություն. համակարգչի կողմից քրոմատոգրաֆիկ գագաթի գագաթնակետի տարածքի չափման հաշվողական գործընթաց:

Չափորոշման կոր. բաղադրիչի պարունակության գծային կոր՝ ընդդեմ պատասխանի արժեքի, որը ստեղծվել է ստանդարտ նյութի հայտնի քանակից, որն օգտագործվում է անալիտի անհայտ պարունակությունը որոշելու համար:

ՄԱՍ
04 Հեղուկ քրոմատագրության քանակական անալիզ

1. Ընտրեք քանակական վերլուծության համար հարմար քրոմատոգրաֆիկ մեթոդ.

l Հաստատեք հայտնաբերված բաղադրիչի գագաթնակետը և հասեք 1,5-ից ավելի լուծաչափի (R):

l Որոշել փորձարկվող բաղադրիչների քրոմատոգրաֆիկ գագաթների հետևողականությունը (մաքրությունը).

l Որոշել մեթոդի հայտնաբերման և քանակական սահմանաչափը.զգայունություն և գծային տիրույթ

2. Սահմանել տրամաչափման կոր՝ տարբեր կոնցենտրացիաների ստանդարտ նմուշներով

3. Ստուգեք քանակական մեթոդների ճշգրտությունն ու ճշգրտությունը

4. Օգտագործեք համապատասխան քրոմատոգրաֆիայի կառավարման ծրագրակազմը նմուշների հավաքագրման, տվյալների մշակման և հաշվետվությունների արդյունքների իրականացման համար

ՄԱՍ
05 Քանակական գագաթների նույնականացում (որակական)

Որակապես բացահայտեք յուրաքանչյուր քրոմատոգրաֆիկ գագաթնակետ, որը պետք է քանակականացվի

Նախ, օգտագործեք ստանդարտ նմուշը` որոշելու համար քանակական գնահատվող քրոմատոգրաֆիկ գագաթնակետի պահպանման ժամանակը (Rt):Համեմատելով պահպանման ժամանակը, գտե՛ք անհայտ նմուշի յուրաքանչյուր քրոմատոգրաֆիկ գագաթնակետին համապատասխան բաղադրիչը:Քրոմատոգրաֆիկ որակական մեթոդը պահպանման ժամանակը ստանդարտ նմուշի հետ համեմատելն է:Չափանիշը Անբավարար էհետագա հաստատում (որակական)

1. Ստանդարտ ավելացման մեթոդ

2. Միաժամանակ օգտագործեք այլ մեթոդներ՝ այլ քրոմատոգրաֆիկ մեթոդներ (փոխել մեխանիզմը, օրինակ՝ օգտագործելով տարբեր քրոմատոգրաֆիկ սյունակներ), այլ դետեկտորներ (PDA՝ սպեկտրի համեմատություն, սպեկտրի գրադարանի որոնում, MS՝ զանգվածային սպեկտրի վերլուծություն, սպեկտրի գրադարանի որոնում)

3. Այլ գործիքներ և մեթոդներ

ՄԱՍ
06 Քանակական գագաթնակետային հետևողականության հաստատում

Հաստատեք քրոմատոգրաֆիկ առավելագույն հետևողականությունը (մաքրությունը)

Համոզվեք, որ յուրաքանչյուր քրոմատոգրաֆիկ գագաթնակետի տակ կա միայն մեկ չափված բաղադրիչ

Ստուգեք համակցող նյութերի (կեղտերի) միջամտությունը

Քրոմատոգրաֆիկ գագաթնակետային հետևողականության (մաքրության) հաստատման մեթոդներ

Համեմատելով սպեկտրոգրամները ֆոտոդիոդային մատրիցային (PDA) դետեկտորների հետ

Պիկ մաքրության նույնականացում

2996 Մաքրության անկյունի տեսություն

Քանակական մեթոդներ, որոնք սովորաբար օգտագործվում են ՄԱՍ 07-ում

Ստանդարտ կորի մեթոդ, որը բաժանված է արտաքին ստանդարտ մեթոդի և ներքին ստանդարտ մեթոդի.

1. Արտաքին ստանդարտ մեթոդԱմենաշատը օգտագործվում է հեղուկ քրոմատագրության մեջ

Հայտնի կոնցենտրացիաների մի շարք ստանդարտ նմուշներ են պատրաստվել՝ օգտագործելով որպես ստանդարտ նմուշներ փորձարկվող միացությունների մաքուր նմուշներ:ներարկվում է սյունակում մինչև դրա պատասխանի արժեքը (գագաթնակետային տարածքը):
Որոշակի միջակայքում կա լավ գծային հարաբերություն ստանդարտ նմուշի կոնցենտրացիայի և պատասխանի արժեքի միջև, այն է՝ W= f×A, և ստացվում է ստանդարտ կոր:

Ճիշտ նույն փորձարարական պայմաններում ներարկեք անհայտ նմուշը՝ չափվող բաղադրիչի պատասխանի արժեքը ստանալու համար:Ըստ հայտնի գործակցի f-ի՝ կարելի է ստանալ չափվող բաղադրիչի կոնցենտրացիան։

Արտաքին ստանդարտ մեթոդի առավելությունները.պարզ գործողություն և հաշվարկ, դա սովորաբար օգտագործվող քանակական մեթոդ է.կարիք չկա, որ յուրաքանչյուր բաղադրիչ հայտնաբերվի և մաքրվի.պահանջվում է ստանդարտ նմուշ;ստանդարտ նմուշի և անհայտ նմուշի չափման պայմանները պետք է համապատասխանեն.ներարկման ծավալը պետք է ճշգրիտ լինի:

Արտաքին ստանդարտ մեթոդի թերությունները.Փորձարարական պայմանները պետք է լինեն բարձր, ինչպիսիք են դետեկտորի զգայունությունը, հոսքի արագությունը և շարժական փուլի կազմը չեն կարող փոխվել.յուրաքանչյուր ներարկման ծավալը պետք է լավ կրկնելիություն ունենա:

2. Ներքին ստանդարտ մեթոդՃշգրիտ, բայց անհանգիստ, ամենից շատ օգտագործվում է ստանդարտ մեթոդներում

Ներքին ստանդարտի հայտնի քանակությունը ավելացվում է ստանդարտին, որպեսզի ստացվի խառը ստանդարտ, և պատրաստվում են հայտնի կոնցենտրացիայի աշխատանքային ստանդարտների շարք:Ստանդարտի և ներքին ստանդարտի մոլային հարաբերակցությունը խառը ստանդարտում մնում է անփոփոխ:Ներարկեք քրոմատոգրաֆիկ սյունակում և որպես պատասխան արժեք վերցրեք (նմուշի գագաթնակետի ստանդարտ տարածք/ներքին ստանդարտ նմուշի գագաթնակետային տարածք):Համաձայն արձագանքման արժեքի և աշխատանքային ստանդարտի կոնցենտրացիայի գծային հարաբերությունների, այն է՝ W= f×A, կազմվում է ստանդարտ կոր։

Ներքին ստանդարտի հայտնի քանակն ավելացվում է անհայտ նմուշին և ներարկվում սյունակում` չափվող բաղադրիչի պատասխանի արժեքը ստանալու համար:Ըստ հայտնի գործակցի f-ի՝ կարելի է ստանալ չափվող բաղադրիչի կոնցենտրացիան։

Ներքին ստանդարտ մեթոդի բնութագրերը.Գործողության ընթացքում նմուշը և ներքին ստանդարտը խառնվում են իրար և ներարկվում քրոմատոգրաֆիկ սյունակում, այնպես որ, քանի դեռ չափված բաղադրիչի քանակի և խառը լուծույթի ներքին ստանդարտի հարաբերակցությունը հաստատուն է, նմուշի ծավալի փոփոխությունը. քանակական արդյունքների վրա չի ազդի..Ներքին ստանդարտ մեթոդը փոխհատուցում է նմուշի ծավալի և նույնիսկ շարժական փուլի և դետեկտորի ազդեցությունը, ուստի այն ավելի ճշգրիտ է, քան արտաքին ստանդարտ մեթոդը:

ՄԱՍ
08 Քանակական վերլուծության արդյունքների վրա ազդող գործոններ

Վատ ճշգրտությունը կարող է պայմանավորված լինել հետևյալով.

Սխալ գագաթնակետային տարածքի ինտեգրում, նմուշի տարրալուծում կամ կեղտեր, որոնք առաջացել են նմուշի պատրաստման ընթացքում, նմուշի սրվակը փակված չէ, նմուշի կամ լուծիչի ցնդում, նմուշի սխալ պատրաստում, նմուշի ներարկման խնդիրներ, ներքին ստանդարտի սխալ պատրաստում

Վատ ճշգրտության հնարավոր պատճառները.

Սխալ գագաթնակետային ինտեգրում, ներարկման կամ ներարկիչի հետ կապված խնդիրներ, նմուշի քայքայումը կամ կեղտը, որոնք առաջացել են նմուշի պատրաստման ընթացքում, քրոմատոգրաֆիկ խնդիրներ, դեգրադացված դետեկտորի արձագանքը